Sắc ký màng trao đổi anion yếu DEAE

Sắc ký màng trao đổi anion yếu DEAE – Giới thiệu sản phẩm

 

1. Tổng quan

Sắc ký trao đổi anion yếu DEAE là một kỹ thuật tinh chế dựa trên sự khác biệt về tính chất điện tích và mật độ điện tích của các phân tử sinh học khác nhau. Vì hầu hết các đại phân tử sinh học đều chứa các nhóm chức năng như nhóm carboxyl hoặc hydroxyl nên đặc tính điện tích và cường độ của chúng có thể được điều chỉnh bằng cách điều chỉnh độ pH của dung dịch đệm. Sau khi các phân tử sinh học liên kết với môi trường trao đổi anion hoặc cation tích điện trái dấu, sự phân tách đạt được bằng cách thay đổi cường độ ion hoặc độ pH của pha động. Các phân tử có ái lực liên kết yếu hơn sẽ được rửa giải trước, sau đó là những phân tử có ái lực liên kết mạnh hơn, nhờ đó đạt được hiệu quả phân tách

 

2. Ưu điểm của sản phẩm

2.1 Hiệu suất cao: Đạt được khả năng liên kết mạnh ở tốc độ dòng cao hơn tới 40 lần so với sắc ký dựa trên nhựa-. So với sắc ký lớp-đóng gói truyền thống, sắc ký màng rút ngắn thời gian xử lý tổng thể khoảng 30–40 lần.

2.2 Hiệu suất liên kết cao: Sắc ký màng thể hiện khả năng liên kết cao và tốc độ dòng cao trong điều kiện giảm áp suất thấp, cho phép thu giữ các phân tử sinh học tích điện trong một lần đi qua cột.

2.3 Có thể mở rộng và linh hoạt: Chuỗi sản phẩm sắc ký màng đầy đủ có thể đáp ứng nhu cầu tinh chế đại phân tử sinh học đa dạng, bao gồm tất cả các giai đoạn từ phát triển quy trình đến sản xuất{1}}quy mô lớn. Thiết kế cấu trúc kiểu viên nang hỗ trợ cả thao tác sử dụng một lần và tái sử dụng sau khi làm sạch.

2.4 Cải thiện năng suất: Thiết kế nhỏ gọn giúp giảm thiểu diện tích cơ sở. Bằng cách loại bỏ các quy trình đóng gói, làm sạch, xác nhận làm sạch và bảo quản cột, hệ thống có thể được vận hành trực tiếp sau khi cân bằng đệm mà không cần đóng gói hoặc bảo quản cột. Chi phí lao động có thể giảm tới 50%.

 

3. Thông số kỹ thuật

3.1 Vật liệu kết cấu

	quy mô phòng thí nghiệm	quy mô nhỏ	quy mô thí điểm	quy mô sản xuất
Thể tích màng	0,2ml	5ml	140ml	5L
Cấu trúc hỗ trợ màng	Polypropylen (PP)
Vỏ màng	Polypropylen (PP)
Chiếc nhẫn	Silicon

3.2 Đặc tính vận hành

	quy mô phòng thí nghiệm	quy mô nhỏ	quy mô thí điểm	Quy mô sản xuất
Thể tích màng	0,2ml	5ml	400ml	5L
Tốc độ dòng chảy khuyến nghị	1-6ml/phút	25-150ml/phút	2-12L/phút	25-150L/phút
Nhiệt độ hoạt động tối đa	35 độ
Áp suất vận hành tối đa	3bar (25 độ)
Áp suất chênh lệch tối đa	3bar (25 độ)
Điều kiện bảo quản	20%乙醇水溶液 Dung dịch nước ethanol 20%

Hình 1. Những thay đổi về khả năng tải sắc ký màng sau nhiều lần sử dụng được theo dõi bằng BSA.

Ngoài ra, chúng tôi đã đánh giá hiệu quả loại bỏ protein và axit nucleic của tế bào chủ bằng phương pháp sắc ký màng DEAE. Kết quả như sau.

	ADN				HCP
	Phục hồi IgG	Hàm lượng (pg/mg IgG) bằng RT PCR		Yếu tố loại bỏ	Nội dung (ng/mg của IgG)bởi Elisa		Yếu tố loại bỏ
Chạy	%	Trước màng DEAE	Sau màng DEAE	Nhật ký	Trước màng DEAE	Sau màng DEAE	Nhật ký
1	96.7	423	3.5	2.08	7.8	5	0.19
2	97.4	438	6	1.86	7.7	4.9	0.20
3	94.7	513	8	1.81	6.3	1.9	0.52
4	95	32	2	1.20	6	4.2	0.15
5	96.3	45	6	0.88	8.1	5.2	0.19
6	96.5	158	3	1.72	8.7	6.2	0.15
7	96.4	267	2	2.13	9.8	7.1	0.14
8	96.8	298	7	1.63	9.4	8.2	0.06
9	97.1	746	5	2.17	4.3	2.6	0.22
10	96.6	39	2	1.29	4.4	1.7	0.41

Bảng 1. Tỷ lệ loại bỏ DNA và protein tế bào chủ khỏi IgG biểu hiện CHO{1}}bằng phương pháp sắc ký màng DEAE.

Một loạt thí nghiệm đã chứng minh rằng sắc ký màng Q có thể loại bỏ tạp chất một cách hiệu quả, đồng thời duy trì tốc độ thu hồi cao của IgG mục tiêu.

Ngoài ra, chúng tôi đã so sánh sắc ký màng Gudiling với các nhãn hiệu nhập khẩu và dữ liệu về khả năng tải như sau.

Hình 2. Hiệu suất tải của các protein khác nhau trên sắc ký màng của chúng tôi và các sản phẩm của đối thủ cạnh tranh

Đánh giá tổng thể cho thấy khả năng chịu tải của chúng tôi tương đương với sản phẩm nhập khẩu.

Hình 3. Hiệu suất của module sắc ký màng DEAE trong xét nghiệm protein collagen

Sử dụng mô-đun sắc ký màng DEAE, kết quả xác nhận cho thấy hầu hết các protein collagen mục tiêu có thể được thu giữ và rửa giải bằng NaCl 135 mM.

Thông qua thử nghiệm trong các điều kiện rửa giải khác nhau, chúng tôi nhận thấy rằng sắc ký màng và sắc ký gel agarose thể hiện hành vi rửa giải tương tự nhau, trong đó độ tinh khiết của protein thay đổi đáng kể dưới các nồng độ muối khác nhau. Trong hoạt động R&D và sản xuất thực tế, cần xác định định lượng các điều kiện rửa giải cân bằng tối ưu để thu được protein mục tiêu có độ tinh khiết cao.

 

4. Các trường hợp ứng dụng cổ điển

Loại bỏ DNA, virus, protein tế bào chủ và nội độc tố

Thu giữ các plasmid, virus, axit nucleic và protein cũng như tinh chế oligonucleotide

 

5. Quy trình vận hành

5.1:Chuẩn bị và lắp ráp thiết bị

5.1.1 Mô-đun sắc ký màng phải được lắp đặt trên hệ thống sắc ký AKTA theo cách tương tự như cột nhựa nhồi, đảm bảo hướng dòng chảy thẳng hàng với các mũi tên và hướng vào. Kết nối bằng đầu nối Luer hoặc phụ kiện kẹp.

5.1.2 Đặt tốc độ dòng khí vào ở mức 5–10 MV/phút và sử dụng bộ đệm cân bằng để lọc không khí. Tiếp tục xả cho đến khi không còn bọt khí ở đầu ra, sau đó nối đầu ra thấm vào hệ thống sắc ký

5.2:Điều trị trước{0}}sử dụng

5.2.1: Đặt tốc độ dòng đầu vào thành 5–10 MV/phút và thực hiện-xử lý sơ bộ bằng NaOH 0,5 M trong hơn 5 MV để đảm bảo màng đạt trạng thái cân bằng.

5.2.2: Với cùng tốc độ dòng chảy, tiếp tục-xử lý trước bằng dung dịch đệm cân bằng (1× PBS) trong hơn 5 MV để đảm bảo màng đạt đến trạng thái cân bằng.

5.3 Quá trình sắc ký

5.3.1

Đặt tốc độ dòng đầu vào thành 5–10 MV/phút và-xử lý trước bằng đệm cân bằng trong hơn 5 MV cho đến khi màng đạt đến trạng thái cân bằng.

5.3.2

Sau khi mẫu được-lọc trước qua bộ lọc 0,22 μm, hãy nạp mẫu cho đến khi quá trình tải hoàn tất hoặc đạt đến khả năng tải sắc ký.

5.3.3

Rửa bằng dung dịch đệm cân bằng trong hơn 10 MV cho đến khi độ hấp thụ tia cực tím giảm xuống mức cơ bản.

5.3.4

Sử dụng rửa giải gradient hoặc rửa giải tuyến tính tùy theo thiết kế quy trình và thu thập mẫu theo từng phần theo yêu cầu.

5.4,CIP Sau{1}}xử lý sử dụng – CIP của thiết bị sắc ký màng

5.4.1

Đặt tốc độ dòng đầu vào thành 5–10 MV/phút và thực hiện xử lý làm sạch-tại chỗ (CIP) bằng NaOH 0,5 M trong hơn 10 MV cho đến khi độ hấp thụ tia cực tím giảm xuống dưới mức cơ bản.

5.4.2

Sau khi rửa tuần hoàn trong 30 phút, chuyển sang rửa bằng nước cho đến khi độ pH nằm trong khoảng 7–8, sau đó tiếp tục làm sạch bằng etanol 20% cho đến khi độ dẫn điện gần như không đổi.

5.5, Lưu trữ sắc ký màng:

Sau khi sử dụng và hoàn thành CIP, mô-đun màng có thể được tháo ra và bảo quản bằng cách ngâm trong etanol 20% hoặc bảo quản trực tuyến ở nhiệt độ phòng trong dung dịch etanol 20%. Dung dịch ethanol 20% cần được kiểm tra và thay thế định kỳ.

 

6.Thông tin đặt hàng

DEAE-loại viên lọc sắc ký màng trao đổi anion yếu

	quy mô phòng thí nghiệm-	quy mô nhỏ	quy mô thí điểm	Quy mô sản xuất
Mẫu sản phẩm	IEXD0002ES	IEXD0050ES	IEXD0400ES	IEXD5000ES
Thể tích màng	0,2ml	5ml	400ml	5L

Chú phổ biến: Máy sắc ký màng trao đổi anion yếu deae, Trung Quốc, nhà cung cấp, nhà sản xuất, nhà máy, bán buôn, số lượng lớn, có hàng, mẫu miễn phí