CM Ion yếu-Sắc ký màng trao đổi

SP Sắc ký màng trao đổi cation mạnh Giới thiệu sản phẩm 

 

2. Ưu điểm của sản phẩm

Nhanh chóng và hiệu quả Khả năng liên kết cao có thể đạt được ở tốc độ dòng nhanh hơn tới 40 lần so với sắc ký nhựa truyền thống. So với phương pháp sắc ký dựa trên nhựa thông thường-, thời gian xử lý bằng phương pháp sắc ký màng có thể giảm 30–40 lần. Tốc độ dòng vận hành điển hình là khoảng 10 MV/phút.

2.2 Sắc ký màng hiệu quả liên kết cao thể hiện khả năng liên kết cao và tốc độ dòng cao khi giảm áp suất thấp, cho phép thu giữ các phân tử sinh học tích điện trong một lần đi qua mô-đun.

2.3 Có thể mở rộng và linh hoạt Toàn bộ các sản phẩm sắc ký màng có thể đáp ứng nhu cầu đa dạng về tinh chế phân tử sinh học, bao gồm các ứng dụng từ phát triển quy trình đến sản xuất{1}}quy mô lớn. Thiết kế dạng viên nang cho phép sử dụng một lần hoặc có thể được làm sạch và tái sử dụng sau các quy trình làm sạch thích hợp.

2.4 Cải thiện năng suất Thiết kế nhỏ gọn giảm thiểu diện tích cơ sở. Bằng cách loại bỏ các hoạt động như đóng gói cột, làm sạch, xác nhận làm sạch và lưu trữ cột, quá trình xử lý có thể bắt đầu sau khi cân bằng đơn giản với ít bộ đệm hơn. Vì không cần phải đóng gói, làm sạch hoặc bảo quản cột nên chi phí nhân công có thể giảm hơn 50%.

 

 

3 thông số kỹ thuật

3.1 Vật liệu kết cấu

	quy mô phòng thí nghiệm	quy mô nhỏ	quy mô thí điểm	quy mô sản xuất
thể tích màng	0,2ml	5ml	140ml	5L
Cấu trúc hỗ trợ màng	Polypropylen
vỏ màng	Polypropylen
Chiếc nhẫn	Silicon

3.2 Đặc điểm vận hành

	quy mô phòng thí nghiệm	quy mô nhỏ	quy mô thí điểm	quy mô sản xuất
thể tích màng	0,2ml	5ml	400ml	5L
Tốc độ dòng chảy khuyến nghị	1-6ml/phút	25-150ml/phút	2-12L/phút	25-150L/phút
Nhiệt độ hoạt động tối đa	35 độ
Áp suất vận hành tối đa	3bar (25 độ)
Chênh lệch áp suất tối đa	3bar (25 độ)
Điều kiện bảo quản	20% ethanolaxếp hàng chờ đợisdung dịch

So sánh cho thấy tuổi thọ của sắc ký màng SP tương đương với SP Sepharose 6FF.

Hình 1. Sự thay đổi khả năng liên kết của sắc ký màng SP sau nhiều lần sử dụng được thử nghiệm với Lysozyme

Ngoài ra, chúng tôi đã đánh giá hiệu quả của sắc ký màng trong việc loại bỏ protein và axit nucleic của tế bào chủ. Kết quả như sau:

	ADN				HCP
	Phục hồi IgG	Hàm lượng (pg/mg IgG) bằng RT PCR		Yếu tố loại bỏ	Nội dung (ng/mg của IgG)bởi Elisa		Yếu tố loại bỏ
Chạy	%	Trước màng Q	Sau màng Q	Nhật ký	Trước màng Q	Sau màng Q	Nhật ký
1	96.4	423	3.6	2.07	7	4.3	0.21
2	97.4	438	4.3	2.01	7	4.7	0.17
3	94.1	513	5.8	1.95	6	2.3	0.42
4	96.2	32	0.8	1.60	6	3.2	0.27
5	96.3	45	1.9	1.37	8	3.4	0.37
6	96.7	158	2.4	1.82	8	3.5	0.36
7	96.4	267	2.6	2.01	9	6	0.18
8	96.8	298	3.6	1.92	9	7	0.11
9	97.9	746	9.8	1.88	4	1.5	0.43
10	96.2	39	3.2	1.09	4	1.4	0.46

Bảng 1. Tỷ lệ loại bỏ DNA và protein tế bào chủ trong CHO{1}}Vật liệu IgG được biểu hiện bằng phương pháp sắc ký màng SP

Một loạt thí nghiệm đã chứng minh rằng sắc ký màng SP có thể loại bỏ các chất gây ô nhiễm một cách hiệu quả trong khi vẫn duy trì tốc độ thu hồi cao của IgG mục tiêu.

Khi so sánh sắc ký màng Gudiling SP với các nhãn hiệu nhập khẩu, dữ liệu về khả năng liên kết như sau:

Ràng buộccnăng lực (mg/mL)	Sartorius	PALL	hướng dẫn
Lysozym	25	32	29
Trypsin	22	27	25

Bảng 2. Hiệu suất liên kết của các loại protein khác nhau trong sản phẩm của chúng tôi và các thương hiệu cạnh tranh

Đánh giá tổng thể cho thấy năng lực ràng buộc của chúng tôi tương đương với sản phẩm nhập khẩu.

Hình 2. Kiểm tra khả năng liên kết của module sắc ký màng SP sử dụng Lysozyme làm chất chuẩn

So với khả năng liên kết động và các sản phẩm nhập khẩu, người ta đã xác nhận rằng hầu hết các protein mục tiêu có thể được thu giữ khi lysozyme được rửa giải trong NaCl 190 mM.

Thông qua các điều kiện rửa giải khác nhau, chúng tôi thấy rằng cấu hình rửa giải của sắc ký màng tương tự như gel agarose, nhưng độ tinh khiết của protein thay đổi đáng kể ở các nồng độ muối khác nhau. Trong hoạt động R&D và sản xuất thực tế, cần xác định định lượng các điều kiện rửa giải tối ưu để thu được protein mục tiêu có độ tinh khiết cao.

 

4 trường hợp ứng dụng điển hình

Loại bỏ DNA, virus và protein của tế bào chủ

Thu giữ các plasmid, virus, protein và tinh chế oligonucleotide

Loại bỏ các sắc tố khỏi môi trường lên men và khả năng thu giữ protein-cao

 

5 Quy trình sử dụng

5.1 Chuẩn bị và lắp ráp thiết bị:

5.1.1:Lắp đặt mô-đun sắc ký màng trên hệ thống sắc ký ÄKTA theo các quy trình tương tự như cột nhựa, đảm bảo hướng dòng chảy thẳng hàng với các mũi tên của mô-đun và hướng đầu vào. Kết nối mô-đun bằng khóa Luer hoặc phụ kiện kiểu kẹp-để tích hợp an toàn vào hệ thống.

5.1.2 Đặt tốc độ dòng cấp liệu thành5–10 MV/phútvà khử khí mô-đun bằng cách sử dụng đệm cân bằng, đảm bảo rằng nước thải không có bọt khí. Sau khi đã khử khí, nối đầu ra chất thấm vào hệ thống sắc ký.

5.2:Xử lý trước{1}}Sử dụng:

5.2.1:

Đặt tốc độ dòng cấp liệu thành5–10 MV/phútvà thực hiện-điều trị trước bằngNaOH 0,5 M cho hơn 5 MV, đảm bảo màng đạt trạng thái cân bằng hoàn toàn.

5.2.2: Ở cùng tốc độ dòng chảy, hãy thực hiện-xử lý trước bằngNaCl 1 M cho hơn 5 MVđể đảm bảo màng đạt trạng thái cân bằng hoàn toàn.

5.3 Quy trình sắc ký

5.3.1 Đặt tốc độ dòng cấp liệu ở mức 5–10 MV/phút và cân bằng màng bằng đệm cân bằng trong hơn 5 MV, cho đến khi màng đạt trạng thái cân bằng hoàn toàn.

5.3.2 Sau khi lọc trước 0,22 μm, nạp mẫu lên màng cho đến khi quá trình nạp mẫu hoàn tất hoặc đạt đến khả năng liên kết sắc ký.

5.3.3 Rửa bằng đệm cân bằng trong hơn 10 MV cho đến khi tín hiệu UV trở về mức cơ bản.

5.3.4 Áp dụng rửa giải gradient hoặc rửa giải từng bước tùy theo thiết kế quy trình và thu thập các phân số theo yêu cầu.

5.4 CIP Post-Sử dụng phương pháp xử lý – Thiết bị sắc ký màng CIP (Vệ sinh tại chỗ)

5.4.1 Đặt tốc độ dòng cấp liệu thành 5–10 MV/phút và thực hiện làm sạch bằng NaOH 1 M trong hơn 10 MV, cho đến khi tín hiệu UV giảm xuống dưới mức cơ bản.

5.4.2 Sau khi tuần hoàn 30 phút, chuyển sang rửa bằng nước cho đến khi pH đạt 7–8, sau đó tiếp tục làm sạch bằng etanol 20% cho đến khi độ dẫn điện gần như không đổi.

5.5 Bảo quản sắc ký màng

Sau khi sử dụng và hoàn thành CIP, mô-đun màng có thể được tháo ra và bảo quản bằng cách ngâm trong etanol 20% hoặc có thể bảo quản-trong dây chuyền ở nhiệt độ phòng trong dung dịch chứa 20% etanol. Dung dịch ethanol 20% cần được kiểm tra và thay thế định kỳ.

 

6. Thông tin đặt hàng

Bộ lọc sắc ký màng trao đổi anion mạnh Q

	quy mô phòng thí nghiệm	quy mô nhỏ	quy mô thí điểm	quy mô sản xuất
Mẫu sản phẩm	IEXQ0002ES	IEXQ0050ES	IEXQ0400ES	IEXQ5000ES
Khối lượng màng	0,2ml	5ml	400ml	5L

Chú phổ biến: cm yếu-sắc ký màng trao đổi ion, Trung Quốc, nhà cung cấp, nhà sản xuất, nhà máy, bán buôn, số lượng lớn, có hàng, mẫu miễn phí