Quy trình thanh lọc hạ lưu vắc xin tiêu chảy cho lợn

Tiêu chảy là một trong ba căn bệnh chính gây thiệt hại kinh tế lớn cho ngành chăn nuôi lợn ở Trung Quốc. Có nhiều yếu tố gây tiêu chảy ở lợn, trong đó yếu tố virus là nghiêm trọng nhất. Lợn ở mọi lứa tuổi đều có thể mắc bệnh, đặc biệt là heo con, tỷ lệ tử vong sau khi nhiễm bệnh có thể lên tới trên 50%. Virus gây bệnh tiêu chảy ở lợn (PEDV) và virus viêm dạ dày ruột truyền nhiễm ở lợn (TGEV) đang lan rộng trên thế giới và hai loại virus này có thể bị nhiễm đơn lẻ hoặc kết hợp. Hiện nay, chưa có thuốc đặc hiệu điều trị PEDV và TGEV, việc phòng ngừa và kiểm soát bệnh tiêu chảy ở lợn chủ yếu là vắc xin thương mại.

Vắc xin truyền thống phòng bệnh tiêu chảy ở lợn chủ yếu bao gồm vắc xin bất hoạt toàn virus và vắc xin sống giảm độc lực. Về mặt lâm sàng, vắc xin bất hoạt hoặc vắc xin giảm độc lực song song PEDV và TGEV, và vắc xin bất hoạt ba lần PEDV, TGEV và rotavirus ở heo (RV) hoặc vắc xin giảm độc lực thường được sử dụng, chủ yếu là vắc xin song song PEDV và TGEV.

Hiện nay, ở Trung Quốc có nhiều loại vắc xin phòng bệnh tiêu chảy ở lợn.

Quy trình sản xuất vắc xin bất hoạt và vắc xin giảm độc lực tương tự nhau, chủ yếu bao gồm năm bước nuôi cấy mầm bệnh, bất hoạt hoặc làm yếu mầm bệnh, chiết xuất và tinh chế mầm bệnh, chuẩn bị và đóng gói vắc xin cũng như kiểm soát chất lượng vắc xin. Bài viết này chủ yếu giới thiệu quy trình thanh lọc mầm bệnh.

Làm rõ

Mục đích của việc làm rõ là để đảm bảo loại bỏ các mảnh vụn tế bào và các tập hợp hạt lớn khác. Trong quá trình nuôi cấy tế bào sản xuất nhiều loại nọc độc, ngoài việc chứa một lượng lớn hạt vi rút, còn có nhiều mảnh vụn mô tế bào và các sản phẩm trao đổi chất và các tạp chất khác, khiến nọc độc ở trạng thái đục hoặc nửa đục, trực tiếp Việc sử dụng hoạt động tập trung nọc độc này sẽ sớm làm cho màng siêu lọc bị tắc, không thể hoàn thành quá trình cô đặc nọc độc, dẫn đến màng siêu lọc bị bong ra. Do đó, trước khi cô đặc nọc độc, trước tiên nó phải được làm rõ, việc này thường được thực hiện bằng cách ly tâm tốc độ thấp và lọc màng. Cần lưu ý khi sử dụng công nghệ tách màng, do vật liệu màng thường có nhóm âm điện hoặc kỵ nước nên cần khảo sát xem vật liệu màng có khả năng hấp phụ các hạt virus hay không.

Một bước làm rõ hiệu quả đòi hỏi sự kết hợp giữa khả năng loại bỏ hạt rắn cao và hiệu suất sản phẩm cao, khả năng khuếch đại dễ dàng và bảo vệ các thiết bị vận hành sau này. Hiện nay, bộ lọc sâu được sử dụng để làm rõ hoạt động.

Tuy nhiên, khi quy mô canh tác quá lớn, sẽ cần một số lượng lớn màng lọc sâu, dẫn đến chi phí vật tư tiêu hao tăng đáng kể. Đồng thời, mật độ nuôi cấy tế bào cao sẽ làm giảm tải cho màng lọc sâu, dẫn đến tăng chi phí và pha loãng sản phẩm quá mức.

Phương pháp vi lọc chủ yếu sử dụng thiết bị lọc dòng tiếp tuyến, và các thành phần màng là băng cassette màng phẳng và sợi rỗng. Lọc dòng tiếp tuyến (TFF) được điều khiển bởi sự chênh lệch áp suất xuyên màng. Các chất và tạp chất nhỏ hơn kích thước lỗ màng sẽ đi qua màng, trong khi các tạp chất như tế bào có hạt lớn hơn sẽ bị giữ lại. Kích thước lỗ của màng dùng cho vi lọc là {{0}},45/0,22μm. Vi lọc dòng tiếp tuyến sợi rỗng có thể xử lý trực tiếp chất lỏng có hàm lượng chất rắn cao, chẳng hạn như môi trường nuôi cấy tế bào mật độ cao, có thể loại bỏ các bước ly tâm và lọc trước với ít bước hơn và vận hành đơn giản, màng có thể được sử dụng nhiều lần thông qua làm sạch, giảm đầu tư và vận hành thiết bị chi phí, phù hợp với yêu cầu của sản xuất tự động hóa mô-đun.

Nồng độ và thanh lọc

Sau khi làm rõ sơ bộ, môi trường nuôi cấy virus vẫn chứa một lượng lớn tạp chất, bao gồm các hạt khiếm khuyết, vỏ virus, độc tố tế bào, môi trường, huyết thanh và các mảnh tế bào, v.v. Nếu tiêm những tạp chất này vào động vật, chúng không chỉ ảnh hưởng đến hiệu quả của thuốc. vắc-xin mà còn gây ra phản ứng miễn dịch mạnh mẽ của vật chủ, thậm chí dẫn đến cái chết của động vật được tiêm phòng. Do đó, cần tập trung và tinh chế để loại bỏ các tạp chất như dị protein và các mảnh tế bào, tăng cường và tạo ra các phản ứng miễn dịch hiệu quả, giảm lượng vắc xin sử dụng và giảm các phản ứng bất lợi.

Nguyên tắc thanh lọc virus: lấy hoạt động sinh học và khả năng lây nhiễm của virus làm tiền đề, loại bỏ tạp chất của virus và chiết xuất độ tinh khiết cao của virus.

Hiện nay, phương pháp cô đặc và tinh chế chính được sử dụng trong sản xuất quy mô lớn là siêu lọc.

Phương pháp siêu lọc, chủ yếu sử dụng thiết bị siêu lọc dòng tiếp tuyến, hệ thống lọc sợi rỗng và các thiết bị lọc khác, trong trường hợp bình thường, việc áp dụng phương pháp siêu lọc có thể khiến virus tập trung hơn 100 lần, tỷ lệ loại bỏ dị protein lên tới 99%. Trong số đó, công nghệ lọc màng sợi rỗng có ưu điểm là lực cắt nhẹ và thấp, dễ cắm, vận hành linh hoạt, tuổi thọ cao và chi phí thấp, dễ khuếch đại nên nên chọn sợi rỗng để cô đặc và tinh chế virus.

Khi sử dụng phương pháp siêu lọc để cô đặc và tinh chế, điều rất quan trọng là chọn kích thước lỗ màng thích hợp, điều này quyết định trực tiếp đến hiệu quả và chất lượng của quá trình cô đặc. Một mặt, cần phải chọn khẩu độ màng để bẫy các phân tử mục tiêu một cách hiệu quả để đảm bảo năng suất, mặt khác, cần xem xét đầy đủ hiệu quả loại bỏ và tốc độ xử lý của các dị loại. Do đó, nguyên tắc tốt nhất là chọn màng có kích thước lỗ lớn nhất có thể bẫy phân tử mục tiêu và cố gắng chọn màng lọc có phân bố kích thước lỗ đồng đều.

Virus gây bệnh tiêu chảy ở lợn (PEDV) và virus viêm dạ dày ruột lây truyền (TGEV) đều là những loại virus Corona, có dạng hình cầu đa hình, có gai giống như gai lộn ngược, có đường kính từ 60 đến 190nm. Bệnh Rotavirus là một bệnh lây truyền từ động vật sang người, trong đó rotavirus (RV) có hình dạng giống bánh xe và có đường kính khoảng 70nm. Nói chung, ba loại vi-rút này có thể bị chặn bằng cách sử dụng màng siêu lọc khẩu độ 100-750kd.

Công nghệ hướng dẫn là một doanh nghiệp công nghệ cao quốc gia tập trung vào dược phẩm sinh học, nuôi cấy tế bào, tinh chế và tập trung y sinh, chẩn đoán và chất lỏng công nghiệp. Chúng tôi đã phát triển thành công các thiết bị lọc ly tâm, băng siêu lọc & vi lọc, bộ lọc vi rút, hệ thống TFF, bộ lọc sâu, sợi rỗng, v.v. Đáp ứng đầy đủ các kịch bản ứng dụng của dược phẩm sinh học, nuôi cấy tế bào, v.v. Màng và bộ lọc màng của chúng tôi được sử dụng rộng rãi trong quá trình cô đặc, chiết xuất và tách tiền lọc, vi lọc, siêu lọc và lọc nano. Nhiều dòng sản phẩm của chúng tôi, từ hệ thống lọc nhỏ trong phòng thí nghiệm sử dụng một lần đến hệ thống lọc sản xuất, kiểm tra độ vô trùng, lên men, nuôi cấy tế bào, v.v., đều đáp ứng nhu cầu thử nghiệm và sản xuất. Guidling Technology rất mong được hợp tác cùng các bạn!