Biện pháp phòng ngừa sử dụng ống siêu lọc
(1) Chọn ống siêu lọc thích hợp. Nói chung, trọng lượng phân tử được giữ lại không được lớn hơn 1/3 trọng lượng phân tử của protein mục tiêu. Ví dụ, nếu trọng lượng phân tử của protein mục tiêu là 35kDa, ống siêu lọc với trọng lượng phân tử 10kDa có thể được chọn. Nếu trọng lượng phân tử của protein mục tiêu là khoảng 10kd, một ống siêu lọc với trọng lượng phân tử 3KD có thể được sử dụng. Đọc kỹ hướng dẫn sử dụng và chú ý đến khả năng chịu đựng khác nhau của màng siêu lọc với các hóa chất khác nhau.
(2) Siêu lọc mới mua là khô. Thêm nước siêu tinh khiết trước khi sử dụng, và nước sẽ hoàn toàn đi qua màng. Làm mát trước trong bồn nước đá hoặc tủ lạnh trong vài phút. Sau đó đổ nước ra và thêm dung dịch protein. Số tiền được thêm vào không được vượt quá đường trắng trên đỉnh ống. Hoạt động phải nhẹ nhàng. Trước khi thêm dung dịch protein, ống siêu lọc cần được đưa vào đá để làm nóng trước.
(3) Cân bằng. Cả khối lượng và trọng tâm phải được cân bằng. Lưu ý rằng tốc độ và gia tốc không nên quá nhanh, nếu không màng siêu lọc sẽ bị hư hỏng trực tiếp. Bắt đầu siêu lọc ly tâm (ly tâm precooling đến 4 độ). Sau khi RPM của các máy ly tâm khác nhau được chuyển đổi thành G, nó khác nhau. Điều chỉnh gia tốc của máy ly tâm đến bánh răng thấp nhất để giảm áp lực lên màng. Lưu ý rằng bạn phải đợi cho đến khi máy ly tâm đạt đến tốc độ mục tiêu trước khi rời khỏi máy ly tâm, nếu không khi có vấn đề với máy ly tâm, bạn không thể xử lý nó ngay lần đầu tiên. Hướng của màng và trục quay phải được điều chỉnh theo hướng dẫn (trong trường hợp máy ly tâm quay góc, màng vuông góc với trục). Trong sử dụng thực tế, tốc độ thường thấp hơn so với hướng dẫn sử dụng, có thể kéo dài tuổi thọ của ống ly tâm.
(4) Khi nó được cô đặc đến 1ml còn lại, lấy dung dịch đệm 50ul và thêm 10ul để chảy qua để xem nó có chuyển sang màu xanh hay không, để đánh giá liệu ống siêu lọc có rò rỉ protein hay không. Nếu ống bị rò rỉ, đổ lớp trên và chảy qua ống mới và bắt đầu siêu lọc. Để đánh giá chính xác liệu ống có bị rò rỉ hay không, hãy ly tâm với BSA 5mgml trong 10 phút, sau đó chảy qua, chạy keo protein hoặc Bradford để đo thô và tiếp tục thêm dung dịch protein còn lại để tập trung (hoạt động trên băng để ngăn protein được làm nóng) cho đến khi tất cả các dung dịch cô đặc được thêm vào. Chú ý đến việc liệu lượng mưa protein có xảy ra trong quá trình ly tâm hay không, dẫn đến tắc nghẽn đường ống. Nếu lượng mưa xảy ra, hãy xác định nguyên nhân cụ thể của lượng mưa, cho dù nồng độ protein quá cao hay bộ đệm không phù hợp; Cái trước có thể được giải quyết bằng cách siêu lọc đồng thời với nhiều ống siêu lọc để giảm nồng độ. Thứ hai là thay đổi các dung dịch đệm khác nhau cho đến khi protein không kết tủa.
(5) Các bước trước được sử dụng để tập trung protein. Nếu bạn muốn thay đổi bộ đệm, khi dung dịch protein tổng thể được tập trung vào khoảng 1ml, nhẹ nhàng thêm một bộ đệm mới (siêu lọc qua màng siêu lọc 0,22um), và sau đó tập trung vào khoảng 1ml trong ba lần liên tiếp. Thể tích cuối cùng của nồng độ cuối cùng phụ thuộc vào nồng độ protein cần thiết, thường không quá 500ul, hoặc nó có thể được tập trung đến dưới 200ul. Theo nồng độ thể tích ít nhất 10 lần mỗi lần, nó có thể đạt hơn 1000 lần ba lần, về cơ bản có thể đạt được mục đích thay đổi bộ đệm.
