Phương pháp bảo dưỡng và sử dụng ống siêu lọc

Phương pháp bảo dưỡng và sử dụng ống siêu lọc

Chức năng của ống siêu lọc:

1) Nồng độ; 2) Khử muối; 3) Thay thế bộ đệm; 4) Nó có tác dụng thanh lọc một phần.

1. Ống siêu lọc mới có thể được sử dụng trực tiếp mà không cần xử lý khác;

2. Ống siêu lọc không thể được khử trùng ở nhiệt độ cao;

3. Xử lý ống siêu lọc khi thay đổi protein cô đặc

Ống siêu lọc có thể được tái sử dụng. Ngâm trong 0. 1M NaOH trong 1-2 giờ, rửa bằng nước, sau đó rửa bằng dung dịch có liên quan (nước khử trùng hoặc PBS) trên máy ly tâm trong 3 lần, có thể được sử dụng để cô đặc protein mới;

4. Xử lý ống siêu lọc thường đặt

Đối với ống siêu lọc thường sử dụng, hãy ngâm ống trong 0. 1M NaOH trong 1-2 giờ, rửa bằng nước và ngâm trong nước đã khử trùng. Đảm bảo giữ cho màng lọc luôn ẩm ướt, ngăn vi khuẩn phát triển;

5. Xử lý ống siêu lọc đặt lâu ngày.

Nếu không sử dụng ống siêu lọc trong thời gian dài, hãy ngâm ống trong 0. NaOH 1M trong 1-2h, rửa sạch bằng nước và ngâm trong etanol 20% để bảo quản. Đảm bảo giữ cho màng lọc luôn ẩm ướt, ngăn vi khuẩn phát triển;

6. Tốc độ ly tâm được sử dụng cho ống siêu lọc

Tốc độ ly tâm nói chung là 4000rpm (khuyến nghị nói chung là 3000g và tối đa không được vượt quá 4000g). Sau khi ly tâm trong 5 - 8 phút, 4ml mẫu có thể được cô đặc còn dưới 1ml đến hàng chục microlit; Nếu tốc độ quá cao, protein đích sẽ rơi ra, dẫn đến mất protein đích; Tốc độ thấp, tốn nhiều thời gian và hiệu quả công việc thấp;

7. Đề phòng khi đầu súng kéo dài vào ống siêu lọc

Khi thêm dung dịch protein hoặc chất đệm vào ống siêu lọc, có thể sử dụng đầu súng màu xanh; Tuy nhiên, khi protein mục tiêu đậm đặc được hấp thụ từ đáy ống siêu lọc thì phải sử dụng đầu súng màu vàng; Khi lắp đầu súng vào ống siêu lọc phải tránh chạm vào màng lọc để tránh làm thủng màng lọc;

8. Giảm sự mất hấp phụ protein của ống siêu lọc

Màng của ống siêu lọc có thể hấp thụ protein, điều này sẽ làm giảm protein mục tiêu khoảng 30 phần trăm; Để giảm sự thất thoát protein, sau khi hấp thụ dung dịch protein đích, tiến hành lọc đáy ống siêu lọc bằng đệm protein để rửa phần lớn protein được màng lọc hấp phụ và giảm sự thất thoát protein đích; Nếu protein tinh khiết được cô đặc, hãy chú ý rằng thể tích cô đặc không được quá nhỏ; Nói chung, bất kể ly tâm như thế nào, khoảng 200 µ L dung dịch protein sẽ được giữ lại ở đáy;

9. Cách xác định lỗi của ống siêu lọc

Trong điều kiện sử dụng bình thường, khi màng lọc không bị thủng, dung dịch protein đậm đặc không chứa protein hoặc số lượng rất thấp (bao gồm cả protein đích), trong khi dung dịch lọc đầu tiên có chứa protein đích, điều đó cho thấy màng lọc không hợp lệ và cần được thay ống siêu lọc mới.