Một quy trình hiệu quả và chi phí thấp để làm rõ và siêu lọc các protein tái tổ hợp biểu hiện nấm men

Sự biểu hiện gen ngoại sinh của nấm men không chỉ có thể tạo ra protein và peptide tái tổ hợp, kháng thể và vắc xin, cytokine, yếu tố tăng trưởng, hormone và các hoạt chất sinh học khác mà còn có thể được sử dụng để sản xuất enzyme công nghiệp, thực phẩm chức năng và vật liệu sinh học, có triển vọng ứng dụng rộng rãi. .

 

Hệ thống biểu hiện nấm men bao gồm hai hệ thống biểu hiện thường được sử dụng, đó là hệ thống biểu hiện saccharomyces cerevisiae và hệ thống biểu hiện nấm men methanotrophic. Hệ thống biểu hiện nấm men metanol là hệ thống biểu hiện nấm men được sử dụng rộng rãi nhất hiện nay và Pichia là hệ thống được sử dụng phổ biến nhất, có thể sử dụng metanol làm carbon và năng lượng. Ngoài ra còn có men Hansen, Sphaeroides, v.v.

 

Bất kể loại hệ thống biểu hiện nấm men nào, quá trình phân tách và tinh chế ở hạ lưu của nó đều tương tự nhau và quy trình cụ thể lấy biểu hiện nấm men của protein tái tổ hợp và thuốc polypeptide làm ví dụ.

 

Các băng cassette màng vi lọc dẫn hướng sử dụng kênh dòng mở và chế độ lọc dòng tiếp tuyến, có thể xử lý hiệu quả chất lỏng thức ăn phức tạp như chất lỏng lên men nấm men và chất lỏng bẻ khóa E. coli ở tốc độ cao và có thể đảm bảo khuếch đại tuyến tính từ quy mô thử nghiệm nhỏ đến quy mô sản xuất. Thiết kế mô-đun nhỏ gọn, kết nối đường ống đơn giản, tính độc lập và khả năng đọc của hệ thống có thể bảo vệ người vận hành và ngăn ngừa ô nhiễm sinh học. Và không có xác minh bảo trì và làm sạch. Vì vậy, nó rất phù hợp cho bước làm rõ của quá trình xử lý xuôi dòng sớm.

 

Mục đích chính của quá trình UF/DF là loại bỏ tạp chất và thay thế chất đệm. Băng màng siêu lọc dẫn hướng có tính đồng nhất tốt về kích thước lỗ màng và tính ưa nước mạnh, có thể giúp màng có dòng chảy cao hơn và hấp thụ protein thấp hơn, đồng thời thiết kế kênh dòng chảy được tối ưu hóa, giảm áp suất nhỏ hơn, vận chuyển vật liệu dễ dàng và rút ngắn đáng kể thời gian lọc. Hơn nữa, dòng sản phẩm hoàn chỉnh và linh hoạt để đáp ứng nhu cầu của nhiều ứng dụng ở quy mô khác nhau. Vì vậy, nó rất phù hợp cho bước UF/DF của quá trình xử lý tiếp theo.

 

Sau đây là trường hợp ứng dụng của màng dẫn hướngbăng cassettetrong biểu hiện nấm men của protein tái tổ hợp.

 

Làm rõ vi lọc

Chúng tôi đã sử dụng băng cassette lỗ chân lông {{0}},11 mét vuông 0,22μm để làm rõ chất lỏng lên men nấm men 1,5L (trọng lượng phân tử protein mục tiêu 42-55 KD) bằng phương pháp vi lọc. Trong toàn bộ quá trình vi lọc, tốc độ thu hồi của protein mục tiêu, sự thay đổi độ đục và sự suy giảm dòng chảy màng đã được nghiên cứu.

0-17phút là quá trình cô đặc, 17-32phút là quá trình rửa và lọc. Trong toàn bộ quá trình vi lọc, TMP tăng dần, tốc độ đầu vào của chất lỏng không thay đổi và dòng vật liệu trung bình là 45LMH.

Độ đục của chất lỏng là 600NTU trước khi vi lọc và 8NTU sau khi vi lọc, và độ đục thay đổi rõ ràng.

Kết quả cho thấy hiệu suất thu được protein mục tiêu là > 90%. Công nghệ dẫn hướng Băng màng 0,22μm ổn định và phù hợp với tình huống ứng dụng này.

 

Nồng độ siêu lọc

 

 

Kết quả cho thấy protein mục tiêu đã bị giữ lại hoàn toàn. Công nghệ dẫn hướng Băng màng 10kd có thể chạy ổn định và phù hợp với tình huống ứng dụng này.

Hầu hết các protein tái tổ hợp được biểu hiện bởi nấm men đều không được biểu hiện cao. Độ đục của chất lỏng lọc rõ ràng đã giảm và tỷ lệ thu hồi protein cao hơn. Do thời gian sắc ký tiếp theo quá dài sẽ gây ảnh hưởng xấu đến protein, để rút ngắn thời gian lấy mẫu sắc ký, có thể thêm một bước nồng độ siêu lọc và protein mục tiêu có thể được cô đặc nhanh chóng sau mẫu, có thể đạt được mục đích tiết kiệm thời gian, giảm khối lượng chất độn và do đó giảm chi phí sản xuất.

 

Các băng cassette màng vi lọc Công nghệ hướng dẫn nói chung có thể giảm độ đục của chất lỏng cấp xuống dưới 20NTU, đáp ứng đầy đủ nhu cầu của quá trình siêu lọc và sắc ký tiếp theo. Tỷ lệ thu hồi siêu lọc của băng màng siêu lọc sẽ khác nhau do các vật liệu khác nhau, tỷ lệ thu hồi chung có thể đạt tới 90-95%.

Công nghệ hướng dẫn hoan nghênh bạn yêu cầu bộ dụng cụ kiểm tra để đánh giá liên quan.

 

Về hướng dẫn

Công nghệ hướng dẫn là một doanh nghiệp công nghệ cao quốc gia tập trung vào dược phẩm sinh học, nuôi cấy tế bào, tinh chế và tập trung y sinh, chẩn đoán và chất lỏng công nghiệp. Chúng tôi đã phát triển thành công các thiết bị lọc ly tâm, băng siêu lọc & vi lọc, bộ lọc vi rút, hệ thống TFF, bộ lọc sâu, sợi rỗng, v.v. Đáp ứng đầy đủ các kịch bản ứng dụng của dược phẩm sinh học, nuôi cấy tế bào, v.v. Màng và bộ lọc màng của chúng tôi được sử dụng rộng rãi trong quá trình cô đặc, chiết xuất và tách tiền lọc, vi lọc, siêu lọc và lọc nano. Nhiều dòng sản phẩm của chúng tôi, từ hệ thống lọc nhỏ trong phòng thí nghiệm sử dụng một lần đến hệ thống lọc sản xuất, kiểm tra độ vô trùng, lên men, nuôi cấy tế bào, v.v., đều đáp ứng nhu cầu thử nghiệm và sản xuất. Guidling Technology rất mong được hợp tác cùng các bạn!