Câu hỏi thường gặp về thiết bị lọc ly tâm
Q1. Cần tách các protein có khối lượng phân tử khác nhau, vậy khối lượng phân tử của các protein cần chênh lệch nhau bao nhiêu?
Trả lời: Kích thước của hai protein cần phải khác nhau từ 10 lần trở lên.
Q2. Có thể ly tâmtất cảthiết bị lọc có được tiệt trùng và có khả năng rửa kiềm không?
Trả lời: Nó có thể được khử trùng bằng dung dịch nước etanol 75 phần trăm và màng có thể chịu được 0.1-0.5N rửa bằng kiềm natri hydroxit.
Q3. Xử lý thế nào nếu protein kết tủa trong quá trình cô đặc?
Trả lời: Nếu cô đặc protein quá nhanh hoặc quá cô đặc, có thể gây kết tủa protein và nồng độ cuối cùng của protein sau khi cô đặc không được quá cao; Các protein nhạy cảm với tốc độ cô đặc và có xu hướng kết tủa, đề xuất phương pháp cải tiến:
Giảm tốc độ ly tâm
Sử dụng màng siêu lọc có ngưỡng trọng lượng phân tử cao hơn
Thổi và hút ống cô đặc rồi ly tâm
Q4. lý do có thể tại saothiết bị lọc ly tâmkhông thể ly tâm xuống?
Trả lời: Bạn có thể sử dụng dung dịch nước chứa khoảng 20% ethanol để ly tâm ban đầu nếu không thể ly tâm ống siêu lọc, vì màng siêu lọc khô hoàn toàn, bề mặt của màng kỵ nước yếu và dòng chảy có thể được phục hồi sau khi thấm với mức thấp dung môi sức căng bề mặt.
Q5. Cách sử dụng và bảo quản thiết bị lọc ly tâm đúng cách
Trả lời: Các thiết bị lọc ly tâm nên được ly tâm bằng nước tinh khiết trước khi sử dụng để xác minh tính toàn vẹn của nó. Sau mỗi lần sử dụng cần bảo quản ở trạng thái ẩm để màng không bị khô.
Q6. Làm thế nào để các thiết bị lọc ly tâm loại bỏ nội độc tố?
Trả lời: Các thiết bị lọc ly tâm mà chúng tôi cung cấp chưa được xử lý bằng nội độc tố và do nội độc tố tồn tại rộng rãi trong tự nhiên nên các mẫu cần nội độc tố có thể được làm sạch trước bằng 0.5N natri hydroxit trước khi thí nghiệm, sau đó được rửa bằng Nước RO để loại bỏ hầu hết nội độc tố.
Q7. Khi sử dụng protein đậm đặc để phân tích xuôi dòng, người ta phát hiện ra hiện tượng nhiễu, nguyên nhân là gì?
Trả lời: Các thiết bị lọc ly tâm có thể được rửa trước bằng dung dịch đệm hoặc nước tinh khiết. Nếu vẫn còn cản trở, hãy rửa bằng 0.1N natri hydroxit, sau đó rửa bằng nước tinh khiết.
Q8. It nhận thấy rằng không có protein mục tiêu trong dịch cô đặc sau khi cô đặc. những lý do có thể là gì?
Trả lời: 1) Nồng độ ban đầu của protein không được quá thấp, nếu nồng độ quá thấp, màng có thể không giữ được.
2) Chọn kích thước lỗ màng thích hợp. Nồng độ ly tâm của ống lọc thuộc về quá trình lọc ngõ cụt và kích thước lỗ màng thường nhỏ hơn 2 lần hoặc nhiều hơn protein mục tiêu.
3) Chọn tốc độ ly tâm phù hợp
4) Protein mục tiêu có kết tủa hay không
Q9. Xử lý thụ động thiết bị lọc ly tâm
Trả lời: Tiền xử lý bề mặt của thiết bị lọc ly tâm có thể làm giảm sự mất hấp phụ của protein trên bề mặt màng, trong hầu hết các trường hợp, tiền xử lý cột trước khi cô đặc dung dịch protein pha loãng có thể cải thiện khả năng phục hồi, bởi vì dung dịch có thể lấp đầy phần tiếp xúc các vị trí hấp phụ protein trống trên màng và bề mặt, phương pháp thụ động hóa là ngâm trước cột với một lượng lớn dung dịch thụ động hóa trong hơn 1 giờ, rửa kỹ cột bằng nước cất, sau đó ly tâm cột một lần bằng nước cất để loại bỏ hoàn toàn dung dịch thụ động hóa có thể còn sót lại trên màng, lưu ý không để màng khô sau khi thụ động hóa, nếu muốn giữ lại để sử dụng cho lần sau, bạn cần thêm nước cất vô trùng để giữ ẩm cho màng., vui lòng liên hệ các kỹ sư của chúng tôi cho các giải pháp thụ động phổ biến.
Q10. Màng siêu lọc có lọc các phân tử theo thứ bậc không?
A: Generally speaking, if the dead-end filtration method is used, it is difficult to accurately remove small molecules among several large molecules by ultrafiltration method. This is because the membrane is a porous network structure, and its filtration mechanism is based on retention rather than passage, such as, the cut off rate of molecules larger than 100kd is >95 phần trăm nếu sử dụng màng siêu lọc 100kd, tuy nhiên, các phân tử nhỏ hơn kích thước lỗ của màng không hoàn toàn tự do đi qua màng. Tỷ lệ lưu giữ phân tử của 67kd là hơn 70% và protein của 43kd cũng bị cắt hơn 40%, các thành phần khác nhau trong dung dịch hỗn hợp đi qua màng không đơn giản và dễ dàng như dung dịch một thành phần, Trong thực tế , nếu bạn muốn cô lập hai đại phân tử, chênh lệch khối lượng phân tử giữa chúng phải từ tám lần trở lên.
Q11. Làm thế nào để phân tách hiệu quả các phân tử lớn và nhỏ thông qua siêu lọc?
Trả lời: Do nhu cầu của quy trình, các tạp chất trong đại phân tử được loại bỏ hoặc các phân tử nhỏ được loại bỏ khỏi đại phân tử, đó là điều bình thường trong sản xuất. Điều rất cần thiết là chọn kích thước lỗ màng thích hợp, phương pháp lọc và điều kiện vận hành. Nói chung, nếu đặc điểm kỹ thuật MWCO của màng được chọn giữa hai protein, thì có thể đạt được sự phân tách tương đối lý tưởng. Nếu dung dịch đạm tương đối loãng thì vận hành ở áp suất thấp cũng giúp thu được kết quả tốt hơn. Chọn lọc dòng tiếp tuyến và thực hiện nhiều lần lọc để có hiệu quả phân tách tốt hơn.
